過去十年中顯微鏡攝像機的進步現(xiàn)在可能意味著，對于絕大多數(shù)生物科學應用而言，實驗室可以放棄僅投資一臺高性能攝像機，該領域的**專家之一Simon Watkins，杰出教授和副教授匹茲堡大學細胞生物學教授，免疫學教授，創(chuàng)始人兼生物成像中心主任。

“目前幾乎所有生物科學用途的**佳解決方案是單色科學CMOS [互補金屬氧化物半導體]相機，”沃特金斯補充道。這與幾年前相比發(fā)生了巨大的變化，當時CCD [電荷耦合器件]相機是顯微鏡相機的主要支柱。

CMOS（或sCMOS）和CCD都是數(shù)碼相機中的成像傳感器 - 相當于標準35mm膠片相機中的一塊膠片。按下快門時，光線進入相機，顯微鏡上的圖像（或任何其他圖像）會曝光到傳感器上。CCD按順序轉(zhuǎn)換構成圖像的像素的測量值，而CMOS同時進行轉(zhuǎn)換。“這意味著CCD的讀數(shù)通過單個節(jié)點推動，因此當您向傳感器添加更多像素時，您的**大幀速率會下降，”生物系統(tǒng)產(chǎn)品經(jīng)理Nathan Claxton說道，尼康儀器公司的成像部門。“另一方面，使用科學CMOS，你不一定要犧牲像素的速度。”

當大約十年前科學CMOS**出現(xiàn)時，由于CMOS的靈敏度限制，CCD相機仍然主導著顯微鏡市場。早期的CMOS相機具有正面照明，這意味著它們的量子效率（QE） - 每個像素檢測到的入射光子的比例 - 必然是有限的。背光照明技術 - 后透薄技術 - 早已可用于CCD相機，在超低光應用中具有優(yōu)勢。

前照式CMOS設備仍然是非常有用的相機，當然比傳統(tǒng)的CCD相機更好。然而，在過去兩年中，出現(xiàn)了**新一代背照式科學CMOS相機，QE大于95％，并且所有相同的低讀取噪聲和高幀率**初吸引前照式CMOS用戶相機 - 基本上取代了CCD相機。“不到五年前，CCD仍然是我們**受歡迎的顯微鏡相機。但現(xiàn)在，科學的CMOS已經(jīng)取代了它，“克拉克斯頓說。

顯微鏡成像的標準三角形是分辨率，速度和靈敏度。

“顯微鏡成像的標準三角形一直是分辨率，速度和靈敏度。過去，如果你想在三角形上找到更多的東西，你總是不得不放棄其中一方，“卡爾蔡司顯微鏡北美產(chǎn)品營銷組經(jīng)理Scott Olenych說。“如果你想要更快的速度，你必須放棄靈敏度或分辨率。但你可以說sCMOS擴大了這個三角形 - 而不是選擇一個或兩個邊，你可以讓它們更好。“

因此，沃特金斯博士建議，今天用戶可以選擇單個相機來滿足他們所有的顯微鏡成像需求 - 也許，除了一些利基用途，如旋轉(zhuǎn)盤共聚焦顯微鏡和單分子成像。

但是顏色怎么樣？如果您只進行明場成像，光線充足，那么彩色相機的QE通常較低也不成問題。但是當在低光下使用熒光樣品時 - 例如全內(nèi)反射熒光（TIRF）顯微鏡 - 彩色相機不是您的**佳選擇。因此，如果您使用的是兩用顯微鏡，那么您不需要兩個不同的相機嗎？

有一種更簡單（也更便宜）的解決方案：使用單色sCMOS相機并將其與高速三色透照光源（二極管）配合使用，可以在紅色，綠色和藍色波長之間切換。“它收集來自三個顏色通道的圖像，我所知道的每一塊商業(yè)軟件都可以自動將它們組合在一起并平衡顏色，為您提供彩色圖像，”沃特金斯說。

**款帶有背薄傳感器的sCMOS相機進入市場的是pHotometrics的Prime 95B，這是一款144萬像素的攝像頭，可提供95％的QE（相比前照式sCMOS攝像頭的60-80％QE）。2017年11月，該公司發(fā)布了400萬像素的Prime BSI。“Prime相機提供了近乎**的靈敏度，并允許研究人員專注于相機的其他性能方面。這兩款相機的主要區(qū)別在于Prime 95B的像素比素有更大的像素，而BSI的像素更小，但更多像素，“pHotometrics的科學產(chǎn)品經(jīng)理Rachit Mohindra解釋道。“使用較小的像素，Prime BSI成為空間分辨率的更好選擇，可以看到更精細的功能。95B具有更大的像素，對于更高的放大倍率和進一步**大化的靈敏度變得更好。“

圖像：使用Prime 95B Scientific CMOS相機拍攝的STORM超分辨率圖像。細胞類型：U2OS細胞。曝光時間：30毫秒。放大倍數(shù)：150倍（配置像素大小~73納米）。使用的重建算法：單PSF擬合的**大似然估計（MLE）方法。圖片由紐約大學醫(yī)學院的YanDOng Yin和Eli Rothenberg提供。

目前，pHotometrics憑借目前**可用的背面薄型sCMOS相機在該領域占據(jù)主導地位，但隨著其他制造商進入這個競爭激烈的領域，這種情況很快就會發(fā)生變化。

但是暫時不計算CCD。“CCD相機仍然是顯微鏡成像的重要組成部分，用于成千上萬的顯微鏡，而且每年都會購買很多顯微鏡，”Olenych指出。“由于相對較低的成本和多功能性，它們是許多人選擇用于顯微鏡成像需求的相機選項。”

此外，對于旋轉(zhuǎn)盤共聚焦顯微鏡或單分子研究中的低光成像，一些用戶可能仍然更喜歡電子倍增CCD相機，它使用片上倍增增益來實現(xiàn)單光子檢測靈敏度，而不會影響QE或分辨率。“這是一款研究級相機，永遠用于這兩種應用。但老實說，即使在這些情況下，我也會爭辯說，任何考慮購買新相機的人都應該考慮新的背面薄型sCMOS相機，“沃特金斯博士建議道。“你真正想要一個EMCCD相機的**時間是你**需要放大電路，這可能會產(chǎn)生噪音問題。”

在某些情況下，例如在共聚焦顯微鏡上使用基于陣列的探測器，或者在處理非常快的低光時，用戶仍可能發(fā)現(xiàn)EMCCD更好。**可以確定的方法是：將兩臺攝像機放入您將使用它們的環(huán)境中，然后測試它們。“這是購買顯微鏡相機的主要信息：測試一切，買一次，”沃特金斯博士警告說。“我看到大量買家對這些相機的懊悔。請您的供應商讓您在現(xiàn)實世界的實驗室條件下測試您正在考慮的相機。“

在經(jīng)過深思熟慮的科學CMOS的大躍進之后，顯微鏡相機技術的下一步是什么？“到目前為止，制造商之間的競爭一直是提高相機的速度，同時增加量化寬松，”克拉克斯頓說。“現(xiàn)在許多sCMOS相機的QE為95％，你不能再遠離那里了。隨著更多背照式sCMOS相機的推出，它們將達到這個極限。在短期內(nèi)，我們可能會看到將高QE與低噪聲相結合，同時使像素更小 - 一個大視場，但不要犧牲分辨率來做到這一點。短期內(nèi)的夢想是以非常高的分辨率看待事物，但是在很大的范圍內(nèi)。“